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摘要：目的观察照射后大鼠颌下腺中骨桥蛋白（OPN）的表达量变化，探讨其与电离辐射引起的唾液腺分泌功能减退之间的关系。方法将15只大鼠随机分为对照组、照射后3d组、照射后30d组，每组5只。一次性给予照射组大鼠颌下腺区15Gy X射线照射，分别于照射后3d和30d处死大鼠，摘取双侧颌下腺，固定后行常规石蜡包埋、切片，行免疫组织化学染色后观察大鼠颌下腺中OPN表达量的变化。结果照射后3d和30d大鼠颌下腺OPN表达量均升高（P<0.05），且照射后30d组高于照射后3d组（P<0.05）。结论照射后唾液腺分泌功能降低可能与OPN表达量升高有关。
关键词：电离辐射；骨桥蛋白；口干
0引言
电离辐射是一种能量高度集中的辐射，常在医疗诊断、治疗以及工业检测等领域使用。其中，放疗常应用于恶性肿瘤治疗，取得了良好的临床效果。然而，电离辐射对生物体的影响复杂多变，特别是在放疗中，尽管电离辐射能有效杀死肿瘤细胞，但同时也难以避免会损伤照射区正常组织[1]。例如，在进行头颈部恶性肿瘤放疗后，常引起口干、黏膜炎、溃疡、牙齿龋坏、吞咽困难等多种并发症，其中最为严重的是对唾液腺的损伤，会引起唾液腺分泌功能减退，甚至完全丧失分泌功能，且这种损伤是永久性的、不可逆的，长期还可出现消化功能紊乱、营养不良等全身疾病，严重降低了放疗患者术后的生活质量和身心健康[2-4]。
骨桥蛋白（osteopontin，OPN）是一种多功能细胞因子，广泛参与多种生理和病理过程，如炎症反应、细胞迁移、纤维化以及辐射损伤的修复过程[5-6]。在唾液腺中，OPN主要表达在腺泡细胞和导管细胞，参与唾液的分泌和唾液腺的发育[7-8]。然而，OPN在唾液腺电离辐射损伤中的具体作用及其机制尚未明确。
因此，本研究旨在探讨电离辐射对大鼠颌下腺OPN表达量的影响及其与电离辐射引起的唾液腺分泌功能降低的关系。另外，本研究采用组织学染色和免疫组化技术，对辐射后大鼠颌下腺的形态变化和OPN表达进行了详细分析，探讨唾液腺辐射损伤的可能机制，为放疗后口干病的预防和治疗提供一些研究基础。
1材料与方法
1.1实验动物
将15只8周龄雄性SD大鼠纳入研究，体重200~220g，将其随机分为照射后3d组、照射后30d组和对照组，每组5只。后文中，照射后3d组、照射后30d组被统称为实验组。
SD大鼠购自桂林医学院实验动物中心。
1.2照射方法和条件
（1）一次性给予照射组大鼠颌下腺区15Gy X射线照射。①对照射后3d组、照射后30d组大鼠行腹腔注射麻醉（2%盐酸氯胺酮，130mg/kg），取仰卧位将其平放于自制的木盒中，木盒上覆盖两块2cm厚铅板，遮挡住大鼠颌下腺以外区域，仅将颌下腺暴露在照射野。
②使用固定式深部X线治疗机（电压为300kV，电流为12mA，滤板为2mm厚Al板）对大鼠颌下腺区域一次性给予15Gy X线照射（靶皮距为60cm，剂量率为2Gy/min）[9]。
③照射后给予保温处理以降低老鼠的死亡率，待老鼠完全苏醒后，送回动物房常规饲养。
（2）对照组大鼠仅麻醉，不进行X线照射。
1.3大鼠颌下腺摘取、固定、包埋和切片
（1）在照射后第3d和第30d，对大鼠行腹腔注射麻醉（2%盐酸氯胺酮，130mg/kg），手术摘取大鼠双侧颌下腺，除去淋巴结、脂肪、结缔组织及包膜等其他组织。
（2）采取4%多聚甲醛固定3h后，利用常规石蜡包埋技术，将颌下腺组织包埋块切成2μm厚的连续切片。
1.4方法与试剂
（1）HE染色：对照组和照射组在切片后进行苏木精-伊红（HE）染色，观察颌下腺组织的形态变化，包括细胞体积、间质纤维化程度和腺泡结构等。
（2）免疫组化试验：对对照组和照射组的颌下腺组织切片进行免疫组化染色，以检测OPN的表达量。采用DAB显色法，以OPN特异性抗体为一抗，将用HRP标记的作为二抗。通过光学显微镜观察颌下腺组织中OPN的表达位置。
（3）PV6000免疫组化检测系统和抗大鼠OPN、DAB染色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.5统计学处理
将显微镜（OLympus BX51T）与电脑连接，镜下观察各组颌下腺的免疫组织化学染色切片，并于高倍视野下对每张切片随机选取5个视野拍照，采用ImagePro Plus中文版V8.0图像分析软件分析染色结果，对颌下腺中OPN的表达进行定量分析，以均数加减标准差表示所有数据。
采取SPSS 25.0软件对实验数据进行统计学分析，计量资料采用t检验。比较对照组、照射后3d组和照射后30d组大鼠中OPN表达量以及在不同时间点的表达量，以P<0.05表示数据差异有统计学意义。
2结果
2.1组织病理变化
（1）HE染色结果显示：与对照组相比，15Gy照射后3d组和照射后30d组大鼠颌下腺腺泡和间质均发生了不同程度的改变，且随着照射后时间的延长，实验组大鼠颌下腺损伤程度逐渐加重。
（2）腺泡：与对照组相比，15Gy照射后3d组和照射后30d组大鼠颌下腺腺泡细胞出现坏死和体积减小，有的可见腺泡细胞核浓缩，甚至细胞核裂解等变化，并随着照射后时间的延长呈现进行性加重；照射后30d组大鼠颌下腺出现了部分腺泡细胞细胞膜破碎，腺泡结构紊乱。
（3）间质：与对照组相比，15Gy照射后3d组和照射后30d组大鼠颌下腺的导管腔变窄；照射后3d组和30d组均可见颌下腺组织内上皮增生、血管和导管扩张；照射后30d组大鼠颌下腺导管腔甚至闭塞，间质纤维化程度增加，而且照射后30d组大鼠颌下腺组织小叶间隔和腺门呈现纤维结缔组织样增生，小叶间隔变得明显，如图1所示。
2.2大鼠颌下腺中OPN的表达变化
免疫组化结果显示，OPN主要位于大鼠颌下腺腺泡细胞和导管细胞。
统计学分析结果显示，实验组大鼠颌下腺OPN表达量显著高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）；在实验组中，OPN表达量在照射后3d和30d呈逐渐升高的趋势，差异具有统计学意义（P<0.05）（图2和表1）。
3结论
本研究结果表明，电离辐射对大鼠颌下腺组织结构和OPN表达有明显影响。电离辐射引起的唾液腺组织损伤可能与OPN表达量的改变有关，会进一步影响唾液腺分泌功能。因此，OPN可能是电离辐射引起唾液腺分泌功能降低的潜在分子机制之一。未来研究可进一步探讨OPN在电离辐射引起唾液腺损伤中的作用，以寻找改善电离辐射引起的唾液腺功能减退的策略。
本研究为理解电离辐射对唾液腺的影响及潜在机制提供了新的证据，但仍需要进行更多研究以阐明OPN在电离辐射引起的唾液腺损伤中的具体作用，并验证其在其他动物模型和人类病例中的适用性。
4讨论
本研究主要探讨电离辐射对大鼠颌下腺组织形态和OPN表达的影响以及OPN表达与电离辐射引起的唾液腺分泌功能降低的关系。研究结果显示，电离辐射能够引起颌下腺组织结构的改变，包括细胞体积的减小、间质纤维化程度的增加和腺泡结构的紊乱，并且这些变化会随着照射时间的延长而加重。同时，电离辐射也能够导致颌下腺组织中OPN的表达量显著增加。
电离辐射对颌下腺的损伤机制尚未完全明确，但一般认为与辐射引起的氧化应激、DNA损伤、凋亡、炎症反应、血管损伤等都有关[10-11]。电离辐射能够引起细胞DNA损伤，导致细胞周期阻滞、凋亡或者炎症反应[12]。除此之外，电离辐射还能够引起血管内皮细胞损伤，进一步影响组织的血液供应，导致组织缺血、缺氧和营养物质供应不足[13]。以上这些因素都可能影响到颌下腺的形态和功能。
OPN是一种多功能的磷酸化糖蛋白，主要在骨骼、牙齿、软骨、肌肉和其他结缔组织中表达，其会参与细胞黏附、迁移、存活和信号转导等多种生物学过程[14-15]。OPN被认为是一种应激反应蛋白，能够响应多种应激刺激，包括炎症、损伤、感染和肿瘤[16-17]。在唾液腺，OPN主要表达在腺泡细胞和导管细胞，参与唾液的分泌和唾液腺的发育[18-19]。虽然OPN在电离辐射损伤中的作用尚不明确，但已有研究显示，OPN可能通过其在细胞黏附和信号转导中的作用，参与辐射损伤的修复过程[20-21]。本次实验结果显示，电离辐射能够显著增加颌下腺中OPN的表达量，而且这种增加随着照射后时间的延长而持续。这可能是颌下腺组织对电离辐射损伤的一种自我保护反应，通过增加OPN的表达量来促进组织修复和功能恢复。
然而，与其他组织不同，唾液腺的辐射损伤并不能完全恢复，甚至可能导致永久性的唾液分泌功能降低，这可能与OPN在唾液腺的特殊功能有关。OPN在唾液腺除了参与唾液的分泌，还能够通过与唾液腺上皮细胞的黏附，维持唾液腺的结构完整[22]。电离辐射导致的细胞死亡和间质纤维化可能破坏了OPN与唾液腺上皮细胞的黏附，从而影响了唾液腺的结构和功能[23]。
从临床角度看，唾液腺辐射损伤是放疗中的常见并发症，严重降低了颌面部放疗患者术后的生活质量，并影响其身心健康。因此，对于唾液腺辐射损伤的防护和治疗具有重要的临床意义。OPN作为一种应激反应蛋白，可能是一个潜在的治疗目标。未来的研究可以进一步探索OPN在唾液腺辐射损伤中的作用，以及操控OPN表达对唾液腺辐射损伤的影响[24-25]。
综上所述，本研究发现了电离辐射对大鼠颌下腺中OPN表达和颌下腺组织形态的影响，指出辐射引起的唾液腺分泌功能减退可能与辐射后颌下腺中OPN表达量改变有一定的关系。OPN可能是一个对辐射损伤反应敏感的标志物，也可能是唾液腺辐射损伤的治疗目标。但是，OPN在唾液腺辐射损伤中的具体机制还需要进一步研究，这将有助于找到新的治疗方法，以减轻电离辐射对人体健康的危害。此外，如何利用骨桥蛋白来预防和治疗唾液腺辐射损伤，也是未来研究的重要方向。
参考文献
[1]B R E N N E R DJ,HA L L E J.C o m p u t e d tomography:an increasing source of radiation exposure[J].New England journal of medicine,2007,357(22):2277-2284.
[2]SPIELBERGER R,STIFF P,BENSINGER W,et al.Palifermin for oral mucositis after intensive therapy for hematologic cancers[J].Massachusetts medical society,2004,351(25):2590-8.
[3]BEKTAS-KAYHAN K,OZBEK CD,YAZICIOGLU O,et al.Long-term max illofacial effects of radiotherapy in young nasopharyngeal carcinoma patients:report of 3 cases[J].Journal of clinical pediatric dentistry,2013,37(4):407-410.
[4]KONINGS AW,COPPES RP,VISSINK A.On the mechanism of salivary gland radiosensitivity[J].International journal of radiation oncology,biology,physics,2005,62(4):1187-1194.
[5]DENHARDT DT,GUO X.Osteopontin:a protein with diverse functions[J].FASEB journal:official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology,1993,7(15):1475-1482.
[6]WAI PY,KUO PC.The role of Osteopontin in tumor metastasis[J].Journal of surgical research:clinical and laboratory investigation,2004(2):121(2):228-241.
[7]LUND SA,GIACHELLI CM,SCATENA M.The role of osteopontin in inflammatory processes[J].J cell commun signal,2009,3(3-4):311-322.
[8]LEE S K,KIM E C,WU T X,et al.Expression of osteopontin in rat salivary glands[J].Archives of oral biology,2003,48(9):655-661.
[9]朱红华,鞠昊,公柏娟,等.电离辐射对大鼠颌下腺TNFα和FGF2表达的影响[J].口腔颌面外科杂志,2015,25(4):253-257.
[10]ZHAO W,DIZ D I,ROBBINS M E.Oxidative damage pathways in relation to normal tissue injury[J].British journal of radiology,2007,80(1):23-31.
[11]Stone H B,Coleman C N,Ansche r M S,et al.Effects of radiation on normal tissue:consequences and mechanisms.Lancetoncol,2003,4(9):529-536.
[12]Lorimore S A,Coates P J,Scobie G E,et al.Inflammatory-type responses after exposure to ionizing radiation in vivo:a mechanism for radiation-induced bystander effects?[J].Oncogene,2001,20(48):7085-7095.
[13]RUBIN P,JOHNSTON CJ,WILLIAMS JP,et a l.A perpet ua l cascade of cytokines postirradiation leads to pulmonary fibrosis[J].International journal of radiation oncology biology physics,1995,33(1):99-109.
[14]DENHARDT D T,NODA M,O'REGAN A W,et al.Osteopontin as a means to cope with environmental insults:regulation of inflammation,tissue remodeling,and cell survival[J].Journal of clinical investigation,2001,107(9):1055-1061.
[15]RIT T LING S R,SINGH R.Os teo po ntin in immune-mediated diseases[J].Journal of dental research,2015,94(12):1638-1645.
[16]BROWN L F,PAPADOPOULOS-SERGIOU A,BERSE B,et al.Osteopontin expression and distribution in human carcinomas[J].American journal of pathology,1994,145(3):610-623.
[17]WEBER G F,ZA WAIDEH S,HIK IT A S,et al.Phosphor ylation-dependent interaction of osteopontin with its receptors regulates macrophage migration and activation[J].Journal of leukocyte biology,2002,72(4):752-761.
[18]LUND S A,GIACHELLI C M,SCATENA M.The role of osteopontin in inflammatory processes[J].Journal of cell communication and signaling,2009,3(3-4):311-322.
[19]LEE S K,KIM E C,WU T X,et al.Expression of osteopontin in rat salivary glands[J].Archives of oral biology,2003,48(9):655-661.
[20]UEDE T.Osteopontin,intrinsic tissue regulator of intractable inflammatory diseases[J].Pathology Int ernational,2011,61(5):265-280.
[21]KON S,YOKOSAKI Y,MAEDA M,et a l.Mapping of functional epitopes of osteopontin by monoclonal antibodies raised against defined inter nal sequences[J].Jour nal of cellular biochemistry,2002,84(2):420-432.
[22]NO DA M,VOGEL RL,CRAIG AM,et a l.Identification of a DNA sequence responsible for binding of the 1,25-dihydroxyvitamin D3 receptor and 1,25-dihydroxyvitamin D3 enhancement of mouse secreted phosphoprotein 1(SPP-1 or osteopontin)gene expression[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,1990,87(24):9995-9999.
[23]KON S,MAEDA M,SEGAWA T,HAGIWARA Y,et al.Antibodies to different peptides in osteopontin reveal complexities in the various secreted forms[J].Journal of cellular biochemist ry,2000,77(3):487-498.
[24]CHABAS D,BARANZINI SE,MITCHELL D,et al.The influence of the proinflammatory cytokine,osteo pontin,on autoimmune de myelinating disease[J].Science,2001,294(5547):1731-1735.
[25]Rangaswami H,Bulbule A,Kundu GC.Osteopontin:role in cell signaling and cancer progression[J].Trends in cell biology,2006,16(2):79-87.后台-系统设置-扩展变量-手机广告位-内容正文底部 -
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电离辐射对大鼠颌下腺骨桥蛋白表达的影响论文
人参与 2025-02-21 10:30:22 分类 : 理学 点这评论 作者：团论文网 来源：https://www.tuanlunwen.com/
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