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摘要：文章建立了能够同时测定半夏中尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、腺苷6种化学成分，以及清半夏中次黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷5种成分含量的方法。文章采用高效液相色谱法，选择色谱柱为依利特ODS2（4.6 mm×250 mm，5μm），流动相为甲醇-0.1%甲酸水，梯度洗脱，检测波长为265 nm，对半夏及清半夏中的水溶性成分进行检测，并通过回归方程计算半夏中6种水溶性成分的含量，以及清半夏中5种水溶性成分的含量。结果显示，半夏中的6种成分及清半夏中的5种成分呈良好线性关系。除鸟苷外，清半夏与生半夏相比，其中核苷类成分的含量明显降低，而鸟苷的含量有所增加；炮制后的清半夏中测得的水溶性成分的含量均比生半夏要低，且半夏中的尿嘧啶与黄嘌呤两种成分消失或转化成了其他成分。文章所建立的方法可以一次性检测半夏中的6种水溶性成分和清半夏中的5种水溶性成分，具有简便、灵敏、可控的特点，可作为测定半夏饮片及清半夏中水溶性成分含量的有效方法。
关键词：半夏；清半夏；含量；HPLC
半夏为天南星科植物半夏Pinellia ternata（Thunb.）Breit.的干燥块茎，于夏秋二季采挖，洗净，除去外皮和须根，晒干，即可制成，具有降逆止呕、消痞散结、燥湿化痰等功效[1]。半夏中含有多种化学成分，包括生物碱、氨基酸、有机酸、多糖类、挥发油、核苷类等，药理作用广泛，具有镇咳、抑制腺体分泌、镇吐、抗生育、抗肿瘤等功能[2-4]。核苷类成分作为半夏及其炮制品的主要有效成分之一，是细胞维持生命的基本组成成分，在临床上具有治疗病毒、肿瘤等病症的药理作用[5]，是半夏中主要的水溶性成分[6]。水溶性成分含量的高低是决定半夏药材与饮片质量优劣的重要依据之一[7]。本文采用高效液相色谱法对半夏及其炮制品——清半夏中的水溶性成分进行一次性含量测定，省时方便，准确可控。
1仪器与试药
高效液相色谱仪（日本岛津公司，型号LC-20AT，SPD-20A紫外-可见检测器，LC Solution Version.1.2中文工作站）。
半夏与清半夏由福建承天药业有限公司提供，经福建中医药大学药学院范世明老师鉴定为天南星科植物半夏Pinellia ternata（Thunb.）Breit.的干燥块茎。尿嘧啶、肌苷、腺苷对照品（中国食品药品检定研究所，批号分别为100469-201302、140669-201305、110879-2002021，纯度分别为99.6%、99.1%、99.6%）；次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、鸟苷对照品（四川省维克奇生物科技有限公司，批号分别为wkq18061203、wkq19012305、wkq18042002、wkq18032612，纯度均≥98.0%）。
水为纯净水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1供试品的制备
精准称取生半夏与清半夏饮片各5 g，置于具塞锥形瓶内，加入50 mL的30%甲醇，超声提取30 min，离心处理，取出上清液。向沉淀中加入30 mL的30%甲醇，重复提取一次，离心处理，取出上清液。将两次得到的上清液合并，浓缩干之后，再用30%%甲醇定容至10 mL，再用0.22μm的微孔滤膜过滤，即得供试品。
2.2混合对照品溶液的制备
分别精密称取对照品尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷适量，并向其中分别加入适量甲醇，同时向次黄嘌呤与黄嘌呤中分别加入含5μL氨水的甲醇溶液，摇匀，充分溶解，分别制成1.0 mg/mL对照品储备液。按照尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷、次黄嘌呤、黄嘌呤的顺序依次精密吸取上述对照品溶液300μL、1 300μL、250μL、1 000μL、1 000μL、200μL、150μL置于10 mL容量瓶中，加甲醇，摇匀，定容，即制成每1 mL分别含尿嘧啶30μg，次黄嘌呤20μg，黄嘌呤15μg，尿苷130μg、肌苷25μg、鸟苷100μg、腺苷100μg的混合对照品溶液。
2.3色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；依利特C18柱（250×4.6 mm，5μm），以甲醇为流动相A，0.1%甲酸水为流动相B，梯度洗脱0、2、12、16、26、36、47、53、60、90 min，甲醇（A）：1%、1%、2%、2%、10%、20%、40%、40%、75%、75%；流速为1.0 mL·min-1，柱温30℃,进样量10μL，检测波长265 nm。理论塔板数不低于3 500。
2.4线性关系考察
吸取上述对照品溶液10μL分别进样，以对照品质量浓度为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，计算回归方程。结果见表1。
2.5方法学考察
2.5.1精密度试验
精密吸取“2.2”项下的混合对照品溶液，浓度按照“2.3”项下的色谱条件由低至高排列，连续进样5次，记录峰面积，计算SRSD值（见表2）。结果显示，各成分的SRSD值都处于0.17%~1.48%之间，表明仪器精密度良好，符合定量分析要求。
2.5.2稳定性试验
精密称取半夏样品5 g，按照“2.1”项的方法进行制备。按照“2.3”项下的色谱条件分别于0、2、4、6、12、24 h条件下进样分析，记录峰面积，计算SRSD值（见表2）。结果显示，各成分的SRSD值均处于0.17%~1.68%之间，表明供试品溶液在24 h内保持稳定。
2.5.3重复性试验
精密称取半夏饮片5份，每份5 g，按照“2.1”项的方法进行制备。按照“2.3”项下的色谱条件进样，分别记录峰面积，计算各成分含量(μg/g），并计算SRSD值（见表2）。结果显示，各成分的SRSD值均处于1.02%~3.89%之间，表明该方法的重复性良好。
2.5.4加样回收率试验
精密称取已知含量的样品粉末9份，并随机分为三组，每组3份。三组依次准确加入低、中、高质量浓度的对照品溶液，使加入量分别为样品中含量的0.8倍、1.0倍、1.2倍，制得供试品。按照“2.3”项下的色谱条件进样，记录峰面积，计算回收率及SRSD值。结果显示，半夏和清半夏中7种核苷类成分的平均加样回收率均在99.62%~100.21%之间，SRSD值均小于3.79%（见表2），表明该方法的加样回收率良好。
2.5.5样品测定
根据所建立的含量测定方法测定半夏与清半夏中上述几种成分的含量，结果见图1~3及表3。
3结果与讨论
半夏沿用至今，其炮制品应用广泛。近年来，关于该领域的研究主要集中在比较半夏及其炮制品中的有效成分方面。现有结果表明，半夏中核苷类成分的含量在经过炮制后会出现不同程度的下降[8]，与本实验结果基本一致。本文建立了能够同时测定半夏和清半夏中核苷类化合物的方法。检测结果表明，经过炮制后，除鸟苷外，清半夏与生半夏相比，其中核苷类成分的含量明显降低，而清半夏中鸟苷的含量增加；炮制后半夏中的尿嘧啶与黄嘌呤两种成分消失或转化成了其他成分。该方法可以一次性检测半夏及其炮制品中的7种水溶性成分，简便、灵敏、可控，可以作为测定半夏饮片及其炮制品中水溶性成分含量的有效方法。该方法的建立不仅为不同半夏炮制品指纹图谱的确立提供了依据，也为保障临床用药的安全性和有效性提供了数据支持。
参考文献
［1］国家药典委员会.中国药典(一部)［M］.北京:中国医药科技出版社,2020.
［2］杨冰月,李敏,敬勇,等.半夏及其炮制品化学成分及功效的差异研究［J］.中草药,2018,49(18):4349-4355.
［3］徐丰清,梁永革.半夏的炮制方法及其对药效的影响［J］.双足与保健,2018,27(12):164-165.
［4］王依明,王秋红.半夏的化学成分、药理作用及毒性研究进展［J］.中国药房,2020,31(21):2676-2682.
［5］安施佳,梁洁,刘星晨,等.半夏的质量控制现状及质量标志物预测分析［J］.中华中医药学刊,2023,42(3):168-172.
［6］石琨群,王珏,刘欢欢,等.半夏及其炮制品7种主要核苷类成分差异性分析［J］.中国医院药学杂志,2023,43(11):1232-1238.
［7］屠鹏飞,黄璐琦,陈万生,等.《中华人民共和国药典》(2020年版)中药材和中药饮片质量标准增修订工作思路［J］.中国现代中药,2018,20(12):1459-1464.
［8］邓亮,赵晓琴,张艳霞,等.经方中半夏的炮制方法与现代半夏炮制方法的水溶性小分子成分的比较分析［J］.中国民间疗法,2022,30(10):122-125.后台-系统设置-扩展变量-手机广告位-内容正文底部 -
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半夏与清半夏中水溶性成分的含量测定论文
人参与 2024-09-20 10:07:15 分类 : 理学 点这评论 作者：团论文网 来源：https://www.tuanlunwen.com/
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