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摘要：文章重点探讨银杏叶提取物EGb 761对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）小鼠模型中β淀粉样蛋白（amyloid-beta，Aβ)沉积的影响，采用侧脑室给药方法建立AD小鼠模型，并通过口服给予EGb 761的方式进行干预。研究采用行为学测试（Y迷宫实验）评估EGb 761对AD小鼠认知功能的影响；同时，通过ELISA法检测Aβ1-42和pT181-tau蛋白水平，探究EGb 761对AD标志性蛋白表达的影响。结果显示，EGb 761可明显改善AD小鼠模型中Aβ沉积和tau蛋白磷酸化水平。这表明EGb 761可能通过调节Aβ的产生途径和tau蛋白磷酸化过程来发挥其抗AD作用。
关键词：阿尔茨海默病；银杏叶提取物；淀粉样蛋白；tau蛋白；神经保护
随着全球人口老龄化的加剧，阿尔茨海默病（Alzheimer's Disease，AD）已成为影响全球数百万家庭的重大公共卫生问题。AD是一种进行性的神经退行性疾病，主要特征包括记忆力减退、认知功能障碍，以及日常生活能力下降[1]。
银杏叶提取物（EGb 761）是一种从银杏树（Ginkgo biloba）叶中提取的天然化合物[2]。EGb 761富含黄酮类化合物和萜烯类化合物，具有抗氧化、抗炎、改善血液循环和神经保护等多种生物学活性[3]。这些特性使得EGb 761成为了AD潜在治疗药物的有力候选[4]。
本文通过对AD小鼠进行EGb 761治疗，对其行为学表现、Aβ沉积、tau蛋白磷酸化，以及神经炎症等病理改变进行了评估，以期为AD治疗提供新的思路和依据。
1实验材料
1.1银杏叶提取物的制备与鉴定
银杏叶提取物（EGb 761）购自广西桂林思特新技术公司，主要含有黄酮类化合物（24.8%）和萜烯类化合物（6.2%）。
1.2 AD小鼠模型的建立
Aβ1-42溶液在注射前24 h内制备，并在4℃下静置，促进纤维化。
采用腹腔内注射戊巴比妥钠的方法对小鼠进行麻醉（30 mg/kg体重）。麻醉后，将小鼠固定在立体定位仪上。侧脑室坐标为：X轴（左右）1.5 mm，Y轴（前后）1.0 mm，Z轴（深度）2.0 mm。注入药物，每只2μL。完成注射后封闭，缝合头皮切口，定期消炎。
2实验方法
2.1动物分组和给药方案
实验动物为雄性C57BL/6小鼠（8~10 w，20~25 g）。所有小鼠随机分为5组，每组10只，给药处理4周。
假手术组：侧脑室注射手术，注射2μL生理盐水。
模型组：侧脑室注射手术，注射2μL Aβ1-42。
EGb 761低剂量组：灌胃EGb761 50 mg/kg体重。
EGb 761中剂量组：灌胃EGb761 100 mg/kg体重。
EGb 761高剂量组：灌胃EGb761 200 mg/kg体重。
2.2 Y迷宫实验
实验开始前，小鼠首先在行为学测试（Y迷宫实验）中进行1 min的适应期，此时三个臂的灯光均亮。适应期结束后，随机点亮一个与小鼠所在位置不同的臂的灯光，持续5 s，指示安全区；同时，其余两臂通电，作为刺激条件。小鼠需要在30 s内到达安全区才算成功。每次实验结束后，灯光熄灭，小鼠被带回起始位置。训练持续直到小鼠在一天内能够连续10次刺激中有9次或更多的正确反应，即在通电刺激后10 s内冲向安全区域。记录小鼠的新异臂进入次数。
2.3 ELISA法检AD标志性蛋白的蛋白质水平
（Aβ1-42和pT181-tau）
采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法来定量分析小鼠海马中AD标志性蛋白Aβ1-42水平（KMB3441；Invitrogen Thermo Fisher Scientific）以及tau蛋白磷酸化水平（#58537,FastScanTM Phospho-Tau（Thr181）ELISA Kit，Cell Signaling Technology，Inc.）。
2.4统计学方法
数据统计分析是利用SPSS 22.0软件（IBM,Armonk，NY，美国）完成的，且研究中的所有数据结果均以平均值加减标准差（mean±standard deviation）的形式呈现。组间比较通过单因素方差分析（One-way analysis of variance，One-way ANOVA）进行，且任意两组间比较采用Tukey's HSD test。当P<0.05时，认为结果在统计学上具有显著差异性。
3实验结果
3.1 Y迷宫测试结果
研究发现，假手术组的小鼠错误次数明显低于其他组。与假手术组相比，EGb 761中剂量组的小鼠错误次数无明显差异（P>0.05），表明该剂量的银杏叶提取物能够在一定程度上改善AD小鼠的学习记忆能力（P<0.01）；模型组小鼠的表现最差（P<0.01），表明Aβ1-42注射成功，诱导了AD模型的建立，并对小鼠的学习记忆能力造成了显著影响。具体如图1所示。
3.2 ELISA结果
结果显示，假手术组小鼠海马组织中Aβ1-42和磷酸化tau蛋白（pT181-tau）的水平最低。模型组的Aβ1-42和pT181-tau水平最高。在接受EGb761治疗的小鼠中，EGb 761中剂量组的Aβ1-42和pT181-tau水平显著低于模型组，表明中剂量的EGb 761能够有效降低Aβ1-42和pT181-tau水平。与此同时，EGb 761低剂量组和高剂量组虽然也降低了Aβ1-42和pT181-tau水平，但与中剂量组相比，效果较弱。具体如图2A-B所示。
4讨论
本文通过对不同剂量EGb 761处理的AD小鼠模型进行行为学和生化实验后发现，中剂量的EGb 761能够显著改善AD小鼠的学习记忆能力，并降低AD标志性蛋白的表达水平。
首先，研究发现EGb 761能够显著改善AD小鼠的认知功能，说明其在改善神经元功能方面可能具有重要作用[5]，推测这种改善可能得益于EGb 761的抗氧化特性。
其次，EGb 761能够减少大脑中Aβ斑块的形成，且可能与其对Aβ生成和清除途径的双重调节作用有关[6]。EGb 761可能通过抑制淀粉样蛋白β-分泌酶和γ-分泌酶的活性来减少Aβ的产生，也可能增强脑内Aβ的降解和清除机制，如促进Aβ的转运和降解。
最后，研究观察到EGb 761能够降低AD小鼠大脑异常磷酸化tau蛋白的水平。这一作用可能与EGb 761对GSK-3β的调节有关[7]。通过减少tau蛋白的异常磷酸化，EGb 761可能有助于防止神经纤维缠结形成，从而保持神经细胞内骨架的稳定性和功能。
未来将聚焦于以下方面，首先，开展更多的临床试验，以确定EGb 761在不同AD患者群体中的疗效和优化策略；其次，深入研究EGb 761分子层面的作用机制，特别是其如何与AD的病理过程相互作用。
参考文献
［1］SCHELTENS P,DE STROOPER B,KIVIPELTO M,et al.Alzheimer's Disease［J］.Lancet,2021,397(10284):1577-1590.
［2］YANAN L,RUYING F,ZEHUA L,et al.The associationbetween toxic pesticide environmental exposure and Alzheimer's disease:A scientometric and visualization analysis［J］.Chemosphere,2021,263(prepublish):128238.
［3］MEI C,TONGYAO Y,YUWU Z,et al.Ginkgo biloba extract EGb 761sup?/sup improves cognition and overall condition after ischemic stroke:Results from a pilot randomized trial.［J］.Frontiers in Pharmacology,2023,14:1147860.
［4］Serge G,Sandra S.Efficacy and tolerability of Ginkgo biloba extract EGb 761Ⓡin dementia:a systematic review and meta-analysis of randomized placebo-controlled trials.［J］.Clinical Interventions in Aging,2014,9(default):2065-77.
［5］Savaskan E,Mueller H,Hoerr R,et al.Treatment effects ofGinkgo biloba extract EGb 761Ⓡon the spectrum of behavioral and psychological symptoms of dementia:meta-analysis of randomized controlled trials［J］.International Psychogeriatrics,2017,30(3):285-293.
［6］Fanny L,Philippe G,Yves C,et al.Protection by EGb 761 against beta-amyloid-induced neurotoxicity:involvement of NF-kappaB,SIRT1,and MAPKs pathways and inhibition of amyloid fibril formation.［J］.Free Radical Biology Medicine,2006,41(12):1781-94.
［7］Qin Y,Zhang Y,Tomic I,et al.Ginkgo biloba Extract EGb 761 and Its Specific Components Elicit Protective Protein Clearance Through the Autophagy-Lysosomal Pathway in Tau-Transgenic Mice and Cultured Neurons［J］.Journal of Alzheimer's Disease,2018,65(1):243-263.后台-系统设置-扩展变量-手机广告位-内容正文底部 -
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银杏叶提取物对阿尔茨海默病小鼠模型的治疗潜力及其可能的作用机制论文
人参与 2024-09-26 10:51:13 分类 : 理学 点这评论 作者：团论文网 来源：https://www.tuanlunwen.com/
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