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摘要：文章建立HPLC法，以测定复方锌铁钙口服溶液中总葡萄糖酸根的含量。色谱柱为Ultimate XB NH2（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈（40∶60），检测波长为200 nm，流速为1.0 mL/min，进样量为20μL，柱温为30℃。运用该方法，乳酸与葡萄糖酸能有效分离，且阴性样品不干扰葡萄糖酸根的测定；葡萄糖酸盐在130.36~651.8μg/mL质量浓度范围内线性关系良好（r=0.999），平均回收率为101.34%（SRSD为0.96%）。该方法专属性强、操作简便、灵敏度高、重复性好，能准确测定复方锌铁钙口服溶液中总葡萄糖酸根的含量。
关键词：HPLC；复方锌铁钙口服溶液；葡萄糖酸根
钙、铁和锌是人体必需的矿物质元素。矿物质元素长期摄入不足可能导致多种疾病。维生素B2是人体内黄酶类辅基的组成部分，若缺乏，可影响机体的生物氧化，抑制代谢。国家卫生健康委员会发布的《中国居民营养与健康现状》与我国第四次全国营养调查资料显示，我国居民钙、锌和维生素B2的缺乏程度严重；膳食结构中铁的吸收率较低，致使贫血患病率较高。
复方锌铁钙口服溶液是我国特有品种，目前主要由2家国内企业生产制造。其组分为10 mL含葡萄糖酸钙400 mg、葡萄糖酸亚铁100 mg、葡萄糖酸锌30 mg、维生素B2 3 mg，适用于骨质疏松等钙缺乏症、生长发育迟缓等锌缺乏症、妊娠、儿童发育期等引起的缺铁性贫血，以及口角炎等维生素B2缺乏引发的疾病。用药受众广泛，且大多为孕妇、儿童与老年人，需要对用药安全予以重视。目前，国内外药典与复方锌铁钙口服溶液注册标准均采用原子吸收分光光度法测定金属离子含量的方式控制质量。然而，现有文献报道，国内葡萄糖酸钙口服溶液中多用乳酸或乳酸钙作为助溶剂[1-3]，而助溶剂的添加量对葡萄糖酸钙口服溶液的质量影响显著[4]。因此，有必要同时控制锌铁钙制剂金属离子与葡萄糖酸根的含量，并建立测定复方锌铁钙口服溶液中葡萄糖酸根含量的方法。
1仪器与试药
U3000高效液相色谱仪（赛默飞世尔科技公司，DAD检测器）。葡萄糖酸钠：中国食品药品检定研究院，批号：100332-201102，含量99.8%；复方锌铁钙口服溶液，由A、B 2个公司共提供10批药品；乙腈色谱纯试剂；超纯水、磷酸二氢钾、乳酸均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：Ultimate XB NH2（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈（40∶60）；流速：1.0 mL/min；检测波长：200 nm；柱温：30℃;进样量：20μL。
2.2溶液配制
对照品溶液：取葡萄糖酸钠对照品适量，用水制成含葡萄糖酸根0.38 mg/mL溶液。
样品溶液：精密量取复方锌铁钙口服溶液1 mL，置于100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
阴性样品溶液：按处方组成，依工艺及制法制成缺葡萄糖酸锌、葡萄糖酸钙和葡萄糖酸亚铁的阴性样品；使用样品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
系统适用性溶液：分别取葡萄糖酸钠对照品与乳酸适量，精密称定，用水制成含葡萄糖酸钠与乳酸0.25 mg/mL溶液。
2.3方法学验证
2.3.1专属性
分别精密量取系统适用性溶液、阴性样品溶液、对照品溶液与样品溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。结果如图1所示。该条件下，葡萄糖酸根的保留时间合适、峰形佳，能与乳酸有效分离，同时样品溶液中与相邻色谱峰分离度均大于1.5，阴性样品无干扰。
2.3.2线性和范围
取葡萄糖酸钠对照品0.7301 g，置于100 mL量瓶中，加水适量超声溶解，放冷，再用水稀释至刻度，摇匀，作为葡萄糖酸根对照品贮备液。精密量取葡萄糖酸根贮备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成含葡萄糖酸根质量浓度分别为130.36、260.72、391.08、521.44、651.80μg/mL的标准溶液。
以质量浓度（C，μg/mL）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，得葡萄糖酸根回归方程A=0.082C-0.555 3（r=0.999）。结果表明，葡萄糖酸根在130.36~651.8μg/mL质量浓度范围内与峰面积的线性关系良好。
2.3.3回收率试验
精密量取“2.3.2线性和范围”项下葡萄糖酸根对照品贮备液3 mL，共6份，分别置于100 mL量瓶中，再分别精密加入复方锌铁钙口服溶液（B企业，批号：190707）0.5 mL，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为样品溶液。照“2.1”项下色谱条件开展测定，考查方法的准确度情况。结果平均回收率（n=6）为101.34%，SRSD为0.96%，回收率良好。
2.3.4重复性
取同一批复方锌铁钙口服溶液（B企业，批号：190707），照“2.2”项下方法配制样品溶液共6份；按“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图。结果显示，样品中葡萄糖酸根含量SRSD为1.13%，说明方法重复性良好。
2.3.5精密度与稳定性试验
分别精密量取“2.3.2”项下质量浓度为391.08 g/mL的对照溶液与“2.3.4”项下的样品溶液各一份，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，考察0、2、4、8、12、24 h溶液中葡萄糖酸根的稳定性。结果显示，仪器精密度良好（SRSD分别为0.63%和1.48%），对照品与样品溶液在24 h内稳定（SRSD分别为1.13%和1.03%）。
2.3.6定量限
精确配制葡萄糖酸根系列质量浓度溶液，分别进样，并按峰高为基线噪声的10倍计算。葡萄糖酸根定量限为5.2μg/mL，相当于样品溶液质量浓度的1.2%。
2.3.7耐用性
按照“2.1”项下色谱条件考察不同品牌仪器（戴安U3000与安捷伦Agilent 1260）、色谱柱[CAPCELL PAK NH2（4.6 mm×250 mm，5μm）、Ultimate XB NH2，（4.6 mm×250 mm，5μm）与Shodex Asahipak NH2P-50 4E（4.6 mm×250 mm，5μm）]、流速（0.9、1.0和1.1 mL/min）、柱温（25、30和35℃)、流动相比例[磷酸二氢钾溶液-乙腈（38∶62）、（40∶60）与（42∶38）]、磷酸二氢钾生产厂家（国药集团与天津大茂）的分离情况。结果显示，各条件下葡萄糖酸根与乳酸分离情况佳，与相邻杂质峰均可达到基线分离，表明方法耐用性良好。
2.4样品测定
将2家生产企业的6批复方锌铁钙口服溶液按“2.2”项下方法配制样品溶液，并按“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图。采用外标法以峰面积计算总葡萄糖酸根含量，结果如表2所示。
3讨论
3.1色谱条件的选择
国内外葡萄糖酸根测定方法有多种，包括NMR[5]、IC[6]、HPLC[4，7-10]。HPLC法通常使用离子交换柱、具有离子交换特性的高效硅胶柱、酰胺柱与C18色谱柱。其中，C18色谱柱为实验室常用的通用型色谱柱。因此，笔者采用HPLC法，使用C18色谱柱测定本品中葡萄糖酸根含量。结果显示，CAPCELL PAK C18、Polar RP C18与ThermoSyncronis C18等品牌色谱柱下，葡萄糖酸根峰与相邻杂质峰皆不能有效分离。同时，调整四丁基硫酸氢铵离子对试剂质量浓度、流动相比例等，也不能改善葡萄糖酸根峰与相邻杂质峰的分离情况。同法考察了反相色谱柱CAPCELL PAK（Phenyl）、InerSustain C8与Kromasil C8，发现仍未改善葡萄糖酸根峰与相邻杂质峰的分离情况。考虑到氨基柱适用于正相、反相、弱阴离子交换，且为实验室常用的通用型色谱柱，笔者采用HPLC法，使用氨基柱测定本品中葡萄糖酸根含量，并发现流动相中盐的浓度会影响主峰的出峰时间。结果显示，流动相为0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈为40∶60时，葡萄糖酸根有较好保留，峰形可，与乳酸及相邻杂质峰的分离情况佳。
3.2限度
复方锌铁钙口服溶液中有葡萄糖酸锌、葡萄糖酸钙和葡萄糖酸亚铁3种葡萄糖酸盐组分。葡萄糖酸根的标示量为45.5 mg/mL。样品葡萄糖酸根的测定结果整体偏低，尤其是B厂家3批样品测定值仅为标示量的90%，说明应增加对本品中葡萄糖酸根含量的控制。参考《中华人民共和国药典（2020年版）》对葡萄糖酸盐口服溶液控制的含量范围，建议将复方锌铁钙口服溶液中葡萄糖酸根的限度范围定为41.0~50.0 mg/mL（相当于标示量的90.0%~110.0%）
4结论
本文建立了HPLC法，用以测定复方制剂中葡萄糖酸根的含量。该方法准确、专属性强、灵敏度高、操作简便、结果准确，为复方锌铁钙口服溶液质量标准的完善提供了参考，为科学监管提供了技术保障和执法依据。
参考文献
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人参与 2025-04-12 11:59:03 分类 : 理学 点这评论 作者：团论文网 来源：https://www.tuanlunwen.com/
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